(2)ГОСТР 52677-2006
Настоящий стандарт распространяется на растительные масла и животные жиры, а также на продукты их переработки (гидрогенизированныв. переэтерифицированные, фракционированные жиры и масла, спреды, топленые смеси, маргарины и др.), (далее - жировые продукты) и устанавливает следующие методы определения массовой доли трансизомеров жирных кислот:
Требования к контролируемому показателю установлены в ГОСТ Р 52100 и ГОСТ Р 52178.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р 51486-99 Масла растительные и жиры животные. Получение метиловых эфиров жирных кислот
ГОСТ Р 52062-2003 Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ Р 52100-2003 Слреды и смеси топленые. Общие технические условия ГОСТ Р 52178-2003 Маргарины. Общие технические условия
ГОСТ Р 52179-2003 Маргарины, жиры для кулинарии, кондитерской, хлебопекарной и молочной промышленности. Правила приемки и методы контроля
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности груда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожароезрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3022-80 водород технический. Технические условия
ГОСТ 8285-91 Жиры животные топленыо. Правила приемки и методы испытани
ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности
ГОСТ 19213-73 Сероуглерод синтетический технический. Технические условия
ГОСТ 20288-74 Углерод четыреххлористый. Технические условия
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 25828-83 Гептан нормальный эталонный. Технические условия
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 29228-91(ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания
Отбор проб растительных масел - по ГОСТ Р 52062.
Отбор проб сливочно-раститвльных спредов и топленых смесей - по ГОСТ 26809. Отбор проб растительно-сливочных и растительно-жировых спредов. топленых смесей и маргаринов-по ГОСТР 52179.
Отбор проб животных жиров - по ГОСТ 8285.
4.1 Пробы твердых жиров должны быть полностью расплавлены на водяной бане при температуре не более чем на 10 °С выше их точки плавления и тщательно перемешаны. При наличии в жире мути его фильтруют через складчатый фильтр из фильтровальной бумаги по ГОСТ 12026.
4.2 Выделение жира из эмульсионных жировых продуктов (спреды, маргарины)
Пробы эмульсионных жировых продуктов массой 40-50 г расплавляют в химическом стакане по ГОСТ 25336 вместимостью 150 см3 на водяной бане или в сушильном шкафу при температуре от 40 °С до 60 °С. выдерживают при этой температуре до полного расслоения. Жировой слой отделяют от водного и фильтруют при температуре от 40 =С до 60 °С через складчатый фильтр из фильтровальной бумаги. Если отфильтрованный жир будет прозрачен, то приступают к выполнению измерений. При наличии в жире мути его повторно фильтруют.
5.1 Область применения
Метод предназначен для определения массовой доли изолированных трансизомеров в жировых продуктах с уровнем трансизомеров 5 % и более.
Метод применяется при возникновении разногласий, если массовая доля изолированных трансизомеров более 10 %.
Метод не применим к продуктам:
5.3.2.2 Градуировочные растворы трансизомеров массовыми долями 1 %. 4 % и 7 % В мерных колбах по ГОСТ 1770 вместимостью 10 см3 взвешивают метилолеат в количествах, указанных в таблице 1, записывая результат взвешивания до четвертого десятичного знака. Добавляют пипеткой соответствующие объемы вспомогательного раствора метилэлаидата концентрацией 0,002 г/см3 в каждую из колб, доводят до метки четыреххлористым углеродом (сероуглеродом), закрывают пробкой и раствор хорошо перемешивают.
Таблица 1 - Соотношения компонентов для получения градуировочных растворов трансизомеро массовыми долями 1 %, 4 % и 7 %
| Номинальная массовая доля транcизомеров, % | Вспомогательный раствор метилэлаидата, см3 | Метилолеат. г |
| 1 | 1,00 | 0,198 ± 0,005 |
| 4 | 4,00 | 0,192 ± 0.045 |
| 7 | 7,00 | 0,186 ± 0.005 |
5.3.2.3 Градуироаочные растворы трансизомеров массовыми долями 10 %, 30 %. 50 % и 70 % В мерные колбы вместимостью 10 см3 переносят пипеткой объемы основного раствора метилэлаидата концентрацией 0.020 г/см3 и основного раствора метилолеата концентрацией 0.020 г/см3 в количествах, указанных в таблице 2. Отмеренные объемы должны заполнять колбы точно до метки 10 см3.
Таблица 2 - Соотношения компонентов для получения градуировочных растворов трансизомеро массовыми долями 10 %. 30 %. 50 % и 70 %
| Номинальная массовая доля трансизомеров | Основной раствор метилэлаидата. см3 | Основной раствор метилолеата. см3 |
| 10 | 1,00 | 9,00 |
| 30 | 3,00 | 7,00 |
| 50 | 5,00 | 5,00 |
| 70 | 7,00 | 3,00 |
5,3.3 Градуировка
5.3.3.1 Для каждого градуировочного раствора (см. 5.3.2.2 и 5.3.2.3) вычисляют точную массу трансизомеров в пересчете на метилэлаидат пг г, содержащуюся в 10 см3 раствора, учитывая точное значение исходной навески и последовательное разведение, по формуле
m=C·V (1)
где С - массовая концентрация вспомогательного (для градуировочной зависимости менее 10 % трансизомеров) и основного (для градуировочной зависимости 10 % и более трансизомеров) растворов, г/см3;
V-объем вспомогательного (для градуировочной зависимости менее 10 % трансизомеров) и основного (для градуировочной зависимости 10 % и более трансизомеров) растворов, см3. Каждый градуировочный раствор (см. 5.3.2.2 и 5.3.2.3) анализируют, определяют высоту пика поглощения трансизомеров в области 966-968 см-1 и делают коррекцию базовой линии так как это описано в 5.5.
5.3.3.2 Для трансизомеров массовой долей менее 10 %, используя метод наименьших квадратов, строят градуировочную прямую в координатах: скорректированные по базовой линии значения поглощений при 966-968 см-1 для градуировочных растворов трансизомеров массовой долей 1 %. 4 %. 7 % и 10% (ось у) - масса метилэлаидата в граммах в 10 см3 градуировочного раствора (ось х) и определяют угол наклона и отрезок, отсекаемый на оси у продолжением градуировочной прямой.
5.3.3.3 Для трансизомеров массовой долей 10 % и более также строят градуировочную прямую по 5.3.3.2, используя градуироаочные растворы массовой долей 7 %. 10 %, 30 %. 50 % и 70 %.
5.3.3.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят после смены реактивов, но не реже одного раза в 6 мес. Для этого используют любой градуировочный раствор трансизомеров массовой долей менее 10 % и градуировочный раствор трансизомеров массовой долей 10 % и более. Эти растворы должны быть приготовлены заново по 5.3.2.2 и ло 5.3.2.3.
Стабильность градуировочных характеристик считают удовлетворительной, если для каждого градуировочного раствора выполняется следующее неравенство:
(2)
где К = 10 % -норматив контроля стабильности градуировочной характеристики;
m0 -масса трансизомеров в градуировочном растворе в пересчете на метилэлаидат, г;
mМЭ -масса трансизомеров, определенная в градуировочном растворе по формуле (4), с использованием градуировочных характеристик, в пересчете на метилэлаидат, г. Если неравенство (2) не выполняется, то эксперимент повторяют. Если результат повторного эксперимента неудовлетворительный, то выясняют причины, приводящие к получению неудовлетворительных результатов контроля, и устраняют их. В случае невозможности устранения причин, приводящих к превышению норматива, градуировочную прямую строят заново
5.3.4 Приготовление мотиловых эфиров
5.3.4.1 Пробу анализируемого продукта, подготовленного по 4.1, 4.2, массой 0.5-1,0 г. преобразовывают в метиловые эфиры жирных кислот по ГОСТ Р 51486 и полностью отгоняют растворитель с помощью вакуум-ротационного испарителя.
5.3.4.2 В мерной колбе вместимостью 10 см3 взвешивают (0.20 ± 0,01) г метиловых эфиров (см. 5.3.4.1). записывая результат взвешивания до четвертого десятичного знака. Содержимое колбы доводят до метки четыреххлористым углеродом (сероуглеродом). Колбу закрывают пробкой, и раствор хорошо перемешивают.
5.4 Проведение измерений
5.4.1 Настройку рабочих параметров спектрометра и параметры регистрации спектров устанавливают в соответствии с руководством по эксплуатации прибора для получения инфракрасного спектра с разрешающей способностью 4 см-1, охватывающего спектральный диапазон 900-1050 см-1. Параметры регистрации должны быть идентичны как для градуировочных растворов, nак и для анализируемых проб продуктов.
5.4.2 Однолучевые спектрометры
Чистую кювету заполняют четыреххлористым углеродом (сероуглеродом) и удаляют все воздушные пузырьки. Записывают однолучевой спектр, чтобы использовать его в дальнейшем для сравнения (фон).
Затем заполняют чистую кювету раствором метилового эфира (см. 5.3.4.2) и записывают однолучевой спектр пробы. Далее сопоставпяют спектр пробы со спектром фона и преобразовывают в единицы поглощения.
5.4.3 Двухлучевые спектрометры
Чистую кювету заполняют четыреххлористым углеродом (сероуглеродом), удаляют все воздушные пузырьки, закрывают и помещают в ячейку канала сравнения. Заполняют вторую парную кювету раствором метилового эфира (см, 5.3.4.2). Удаляют все воздушные пузырьки, закрывают и помещают в ячейку канала образца. Делают запись спектра и преобразовывают в единицы поглощения.
5.5 Обработка результатов
5.5.1 На спектре анализируемой пробы продукта проводят базовую пинию к полосе поглощения при 966-968 см-1 (приложение А).
Точки на спектре, между которыми проведена базовая пиния, зависят от пика поглощения. Базовые линии должны быть проведены одинаково как для градуировочных растворов, так и для анализируемых проб продукта. Для анализируемых проб продукта с высокой массовой долей трансизомеров базовая линия должна быть проведена к минимуму около 985 см-1 (см. рисунок А.1).
5.5.2 Вычисляют скорректированное по базовой линии поглощение АC по формуле
АС = Аp-Аb. (3)
где Ар - поглощение пика 966-968 см-1;
Ab - поглощение на базовой линии.
Положение максимума пика будет изменяться в зависимости от прибора и массовой доли трансизомеров в анализируемой пробе. Положение максимума должно быть установлено для каждого прибора на градуировочном растворе, содержащем 70 % трансизомеров. Максимум пика для любой другой концентрации определяется в том же положении.
Используя градуировочные данные для трансизомеров соответствующего диапазона менее 10 % или 10 % и более, вычисляют массу метилэлаидата mМЭ, г. в метиловых эфирах (см. 5.3.4.2) по формуле
(4)
где АC - скорректированное по базовой линии поглощение пика 966-968 см-1, ед. оптической плотности;
а - отрезок, отсекаемый продолжением градуировочной прямой на оси у. ед. оптической плотности;
Ь - тангенс угла наклона градуировочной прямой, ед. оптической плотности / г.
5.5.3 Массовую долю трансизомеров в пересчете на мегилэлаидат ωгр, %. вычисляют по формуле
(5)
где mмэ - масса метилэлаидата (см. 5.5.2), г;
mГ - масса подготовленных метиловых эфиров (см. 5.3.4.2), г.
Вычисления проводят с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.
За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости результатов измерений (см. 5.6).
5.6 Предел повторяемости
Расхождение между результатами двух независимых единичных измерений, выполненных одним и тем же методом на идентичном анализируемом продукте в одной и той же лаборатории одним и тем же аналитиком на одном и том же оборудовании в пределах короткого интервала времени при Р = 0.95, не должно превышать значений пределов повторяемости г:
20 % отн. для трансизомеров массовой долей до 10 % включительно;
10 % отн. для трансизомеров массовой долей свыше 10 %.
5.7 Предел воспроизводимости
Расхождения между двумя единичными результатами испытаний, полученными одним и тем же методом на идентичном анализируемом продукте в различных лабораториях различными операторами на различном оборудовании при Р = 0,95 не должно превышать пределов воспроизводимости R:
40 % отн. для трансизомеров массовой долей до 10 % включительно;
20 % отн. для трансизомеров массовой допей свыше 10 %.
5.8 Границы относительной погрешности δ при Р= 0.95:
± 30 % для трансизомеров массовой долей до 10 % включительно
± 15 % для грансиэомеров массовой долей свыше 10 %.
6.1 Область применения
Метод предназначен для определения массовой доли трансизомеров жирных кислот в жировых продуктах при массовой доле трансизомеров жирных кислот в указанных продуктах менее 10 %. Метод применяют при возникновении разногласий для указанного предела измерений.
6.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы
Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором (ПИД), программированием температуры, инжектором для капиллярных колонок и делителем потока (приблизительно 1:100)
Капиллярная колонка с высокополярной неподвижной фазой CP™-Sil 88 (длиной от 50 до 100 м. с внутренним диаметром 0,25 мм, толщиной пленки жидкой фазы 0,20 мкм), SP-2340 (длиной 60 м, с внутренним диаметром 0.25 мм, толщиной пленки жидкой фазы 0.20 мкм); ВРХ-70 (длиной 50 м, с внутренним диаметром 0,22 мм, толщиной пленки жидкой фазы 0,25 мкм) или подобной высокополярной цианопропилоаой фазой SP-2380 и SP-2560, обеспечивающей аналогичное разделение различных геометрических изомеров.
Для лучшего разделения рекомендуется капиллярная колонка длиной 100 м с высокополярной неподвижной фазой SP-2560 и CP™Sil 88.
Микрошприц вместимостью 1 и 10 мкл по действующему нормативному документу.
Гептан для хроматографии по ГОСТ 25828 (н-гептан).
Гексан для хроматографии по [3].
Воздух по ГОСТ 17433, класс загрязненности 0. Допускается использовать компрессоры любого типа, обеспечивающие необходимое давление и чистоту воздуха согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.
Технический водород марки А по ГОСТ 3022 или электролизный водород от генератора водорода. Газ-носитель газохроматографической чистоты, высушенный и освобожденный от кислорода: газообразный азот по ГОСТ 9293 особой чистоты
газообразный гелий марки А по [4];
технический водород марки А по ГОСТ 3022 или электролизный водород от генератора водорода;
Примечание - Водород в качестве газа-носитепя может удваивать скорость анализа, но чрезвычайно опасен. Работать с водородом можно только с использованием предохранительных приспособлений!
стандартные образцы метиловых эфиров жирных кислот, содержащих трансизомеры [5}. Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с метрологическими и техническими характеристиками не хуже и реактивов по качеству не ниже указанных.
6.3 Подготовка к проведению измерений
6.3.1 Подготовка проб - по 4.11 4.2.
6.3.2 Приготовпение метиловых эфиров жирных кислот - по ГОСТ Р 51486.
6.4 Проведение измерений
6.4.1 Включение и работа с хроматографомв соответствии с руководством по эксплуатации прибора.
6.4.2 Выбор условий измерений
При выборе условий измерений с капиллярной колонкой учитывают следующие переменные величины;
Выбор оптимальных условий газовой хроматографии при температуре инжектора и детектора 250 °С - в соответствии с табпицами 3,4 (см. также приложение Б).
Таблица 3 - Рекомендуемые условия газовой хроматографии для колонок длиной менее 100 м
| Обозначение параметра | Рекомендуемые оптимальные условия | ||
| Неподвижная фаза | SP-2340 | CP™-Sil 68 | ВРХ-70 |
| Длина колонки, м | 60 | 50 | 50 |
| Температурные условия, °С | Изотерма 192 | Изотерма 175 | Изотерма 198 |
| Давление на входе в колонку, кПа | 125 | 130 | 155 |
| Линейная скорость газа-носителя (гелия, азота), см/с | 15 | 19 | 17 |
Таблица 4 - Рекомендуемые условия газовой хроматографии для колонок длиной 100 м
| Обозначение параметра | Рекомендуемые оптимальнее условия | ||
| Неподвижная фаза | SP-2560 | CP™-Sil 88 | CP™-Sil 88 |
| Температурные условия, °С | От 120°С до 240 °C со скоростью 4-8 °С/мин | Изотерма 150 | Изотерма 175 |
| Давление на входе в колонку, кПа | 220 | 170 | 160 |
| Линейная скорость газа-носителя (водорода), см/с | 30 | 30 | 30 |
Примечание - При наличии в анализируемой пробе жирных кислот с числом углеродных атомов в цепи менее 10 начальную температуру программирования снижают до удовлетворительного отделения пиков метиловых эфиров низко молекулярных жирных кислот от пика растворителя.
6.4.3 Подбор оптимальных условий хроматографического анализа
Отбирают микрошприцем 0.3-1,0 мм3 раствора метиловых эфиров (массовой концентрацией приблизительно 7 мг/см3 в н-гептане или гексане, приготовленных из анализируемой пробы ло ГОСТ Р 51486 и вводят в газовый хроматограф.
Сравнивают полученную хроматограмму с типичными хроматограммами, приведенными в приложении В. Если полученное разделение не идентично этим хроматограммам то требуются небольшие изменения в температуре термостата колонок. Температуру термостата колонок постепенно уменьшают или увеличивают на 1 °С пока не получат разделение, идентичное типичным хроматограммам.
Эти небольшие поправки требуются чтобы скорректировать различия как между колонками, так и между приборами контроля температуры, и обычно они находятся в диапазоне только нескольких градусов (плюс или минус) от указанного значения.
Если условия газохроматографического анализа подобраны правильно, полученное разделение должно позволить идентифицировать небольшую примесь изомера С18:1 11цис после пика С18:1 9цис в рафинированных маслах, например соевом. Два цисизомера С18:1 должны четко разделяться (см. приложение В).
6.4.4 Идентификация пиков
Для масел и жиров, рафинированных при высокой температуре, число трансизомеров ограничено, так как у двойных связей образуются только геометрические изомеры в том же самом природном положении. Для жирных кислот С18 образуются такие специфические изомеры:
В некоторых пробах также найдены изомеры С18:2 9транс 12транс и С18:3 транс-транс-цис в очень маленьких количествах.
Для жировых продуктов, содержащих молочный жир и/или частично гидрогенизироеанныемаслаи жиры, трансизомеры идентифицируются с помощью значений эквивалентной длины цепи (ЭДЦ). позволяющих оценить порядок выхода из колонки трансизомеров в зависимости от положения двойной связи в трансконфигурации в углеродной цепи (см. приложение Г).
6.4.5 Проведение измерения
6.4.5.1 Проводят холостой опыт с н-гептаном или гексаном. В холостом опыте не должны быть обнаружены никакие пики. Это испытание повторяют после анализа каждых десяти проб.
6.4.5.2 Отбирают микрошприцем 0,3-1.0 мм3 раствора метиловых эфиров. приготовленных из анализируемой пробы, и вводят в газовый хроматограф. Идентифицируют пики на хромагограмме.
6.5 Обработка результатов
6.5.1 Относительную массу каждого компонента ωx %, вычисляют по формуле
(6)
где
Ах - площадь пика, соответствующего компоненту х, мм2;
АI - сумма площадей всех пиков, исключая gик растворителя, мм2.
6.5.2 Вычисление массовой доли трансизомеров жирных кислот
6.5.2.1 Для масел и жиров, рафинированных при высокой температуре, а также для других жировых продуктов, не содержащих молочный жир и/или частично гидрогенизированные масла и жиры
Вычисляют массовую долю трансиэомеров жирных кислот как сумму относительных масс С18:1 транс, С18:2 транс и С16:3 транс метиловых эфиров жирных кислот.
Максимально возможные пики трансизомеров, которые могут образоваться: С 18:1 транс (1 пик), С 18:2 транс (2 gика) и С18:3 транс (4 пика).
6.5.22 Для жировых продуктов, содержащих молочный жир и/или частично гидрогенизированные масла и жиры
Вычисляют массовую долю трансизомеров жирных кислот как сумму относительных масс всех метиловых эфиров жирных кислот, содержащих двойные связи в трансконфигурации.
6.5.2.3 За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости результатов измерений (см. 6.6).
Если результат определения массовой доли трансизомеров в испытуемой пробе менее 2 %. то окончательный результат записывают до второго десятичного знака.
Если результат определения массовой доли трансизомеров в испытуемой пробе 2 % и более, то окончательный результат записывают до первого десятичного знака.
6.6 Предел повторяемости
Расхождение между результатами двух независимых единичных измерений, выполненных одним и тем же методом на идентичном анализируемом продукте в одной и той же лаборатории одним и тем же аналитиком на одном и том же оборудовании в пределах короткого интервала времени, при Р = 0.95 не должно превышать значений пределов повторяемости г:
6.7 Предел воспроизводимости
Расхождение между двумя единичными результатами испытаний, полученными одним и тем же методом на идентичном анализируемом продукте в различных лабораториях различными оператора-ми, на различном оборудовании, при Р = 0.95 не должно превышать значений пределов воспроизводимости R:
6.8 Границы относительной погрешности δ при Р = 0.95:
7.1 Область применения
Метод предназначен для экспрессного (около 5 мин) определения массовой доли изолированных трансизомеров в жировых продуктах с уровнем трансизомеров 1 % и более. Метод не применим к продуктам:
7.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы
Инфракрасный Фурье-спектрометр или дисперсионный однолучевой спектрометр, позволяющий проводить измерения в диапазоне 900-1050 см-1 с разрешением 4 см-1, с системой обработки данных, осуществляющей перевод спектра в поглощение, масштабирование спектров по осям х и у, считывание спектров с точностью до 1 см-1 по волновому числу и поглощение не хуже 0.001 единицы оптической плотности, а также определение площади под пиком полосы поглощения при 966-968 см-1.
Приставка НПВО с призмой из селенида цинка (или аналогичной), позволяющая поддерживать температуру (65±2)°С. Вместимость ячейки должна быть приблизительно 50 мкл. Для полосы при 966-968 см-1 отношение сигнал-шум в диапазоне 900-1050 см-1 должно быть равно 10:1 или более для пробы, содержащей 1 % триэлаидина. Уровень шума спектра поглощения пустой приставки, полученного за 1 мин. при разрешении 4 см-1 в диапазоне 900-1050 см-1 не должен превышать 0,0005 единиц оптической плотности
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0,0002 г.
Триэлаидин (ТЭ) и триолеин (ТО) с содержанием основного вещества не менее 99 % [2].
Стакан по ГОСТ 25336. вместимостью 10 см3.
Масло растительное, рафинированное отбеленное.
7.3 Подготовка к измерению
7.3.1 Приготовление градуировочных смесей
В стаканчиках по ГОСТ 25336 вместимостью 10 см3 взвешивают с записью результата до четвертого знака (0.3 - х) г триолеина и х г триэлаидина. Где х равен (0.0030 ± 0.0005) г. (0,0150 ±0,0005) г, (0.0300 ± 0.0005) г. (0.0600 ± 0,0005) г, (0,0900 ± 0,0005) г, (0,1200 ± 10,0005) г и {0,1500 ± 0,0005) г. и получают градуировочные смеси массовой долей около 1 %, 5 %, 10 %, 20 %, 30 %. 40 % и 50 % соответственно. Исходя из взятой навески, для каждой градуировочной смеси вычисляют точную массовую долю триэлаидина (в процентах), округляя результат до второго десятичного знака.
7.3.2 Градуировка
Анализируют каждую градуировочную смесь ТЭ/ТО и определяют общую площадь под полосой поглощения при 966-968 см-1 как описано в 7.5.
Пример ИК-спекгра НПВО приведен в приложении Д.
С помощью метода наименьших квадратов строят градуировочную зависимость в координатах: площадь под попосой поглощения при 966-968 см-1 (ось у) - массовая доля ТЭ (ось х). Определяют тангенс угла наклона и отрезок, отсекаемый на оси у градуировочной прямой.
Контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется периодически, но не реже одного раза в 6 мес.
Критерий стабильности градуировочных характеристик - по 5.3.3.4.
7.3.3 Подготовка пробы - по4.1,4,2,
7.4 Проведение измерений
Задают параметры сканирования в соответствии с руководством по эксплуатации спектрометра и приставки НПВО: спектральный диапазон 900-1050 см-1 64 скана (или другое число сканов. требуемое для достижения отношения сигнал-шум в этом диапазоне не более 0,0005 единицы поглощения), разрешение 4 см-1. Параметры регистрации спектров должны быть идентичны как для анализируемых образцов, так и для градуировочных смесей. Для твердых образцов триглицеридов температуру ячейки НПВО следует поддерживать (65 ± 2) °С, но она должна быть одинакова как для материала сравнения, так и для анализируемой пробы.
На призму ячейки наносят несколько капель материала сравнения (материала должно быть достаточно, чтобы полностью покрыть поверхность призмы НПВО). Для градуировочных смесей ТЭ/ТО следует использовать в качестве материала сравнения ТО. Для анализируемых проб в качестве материала сравнения используют рафинированное отбеленное расгитепьное масло.
Регистрируют сравнительный (фоновый) спектр. Очищают призму, вытирая ее мягкой хлопчатобумажной тканью без ворса. На призму наносят анализируемую пробу и регистрируют спектр поглощения при тех же параметрах, что и фоновый спектр.
7.5 Обработка результатов
Определяют площадь под пиком полосы в области 966-968 см-1 в пределах спектрального диапазона 945-990 см-1.
Используя градуировочные характеристики, вычисляют массовую долю трансизомеров в пересчете на метилэлаидат в анализируемой пробе ω %, по формуле
где S - площадь под пиком полосы вобласти 966 см-1 - 968 см-1 в диапазоне 943-990 см-1, см2;
а - отрезок, отсекаемый продолжением градуировочной прямой на оси у, см2;
b - тангенс угла наклона градуировочной прямой. смсм2/%.
Вычисления проводят с точностью до второго десятичного знака с последующим округпением до первого десятичного знака.
За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выпопняется условие приемлемости результатов измерений (см. 7.6).
7.6 Предел повторяемости
Расхождение между результатами двух независимых единичных измерений, выполненных одним и тем же методом на идентичном анализируемом продукте в одной и той же лаборатории одним и тем же аналитиком на одном и том же оборудовании в пределах короткого интервала времени при Р = 0,95, не допжно превышать значений пределов повторяемости г:
7.7 Предел воспроизводимости
Расхождение между двумя единичными результатами испытаний, полученными одним и тем же методом на идентичном анализируемом продукте в различных лабораториях различными операторами на различном оборудовании при Р = 0.95. не должно превышать значений пределов воспроизводимости R:
7.8 Границы относительной погрешности δ при Р - 0.95:
8.1 При выполнении определений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.018 и электробезоласносги при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.
8.2 При выполнении определений по разделу 5 необходимо соблюдать дополнительные требования техники безопасности.
Четыреххлористый углерод - сильный канцероген! Относится к высокоопасным соединениям (2-й класс опасности). Обладает токсическим действием при вдыхании его паров и при попадании растворителя на кожные покровы. Предельно допускаемая концентрация (ПДК) паров четыреххлористого углерода в воздухе рабочей зоны составляет 20 мг/м3.
Работу с чвтыреххлористым углеродом следует проводить только в вытяжном шкафу с нижним dоздухозабором! При этом следует исключить возможность вдыхания паров растворителя и попадания его в капельно-жидком виде на кожные покровы и слизистые оболочки.
При нарушении правил безопасной работы, в случае вдыхания паров четыреххлористого углерода (пары обладают характерным сладковатым запахом) следует немедленно работы прекратить и проветрить помещение. При попадании растворителя на кожные покровы и слизистые оболочки необходимо соответствующий участок промыть теплой водой с мылом.
Сероуглерод представляет собой сильнодействующее ядовитое легковоспламеняющееся вещеcтво. Его необходимо хранить под слоем воды. Все работы с применением сероуглерода необходимо проводить в вытяжном шкафу.
Помещение, в котором проводят работы, должно быть снабжено приточновытяжной вентиляцией.
К проведению измерений допускаются лица, прошедшие специальное обучение дпя работы на соответствующем приборе и инструктаж по технике безопасности.
Рисунок Б.1 - Оптимальные условии дли колонки типа BРХ-70 при 198 °С (изотерма)
Рисунок Б.2 - Оптимальные условия лля колонки типа CP™-Sil 88 при 175 °С (изотерма)
Примечание - Получено на колонке типа CP™-Sil 88 (Chrompack) 50 м x 0.25 мм x 0,20 мкм при температуре 175 °С (изотерма)/ На хроматограмме показаны области цис- и трансизомеров жирных кислот.
Рисунок B.1, лист 1 - Хроматограммы метиловых эфиров частично гидрогенизированного соевого масла
Примечание - Получено на колонке типа SP-2340 (Supelco) 60 м x 0.25 мм x 0,20 мкм при температуре °С (изотерма). На хроматограыме показаны области цис- и трансизоыеров жирных кислот.
Рисунок В.1. лист 2
l
Примечание - Получено не колонке типа ВРХ-70 (SGE) 50 м x 0.22 мм x 0,25 мкм при температуре 198 °С (иpотерма). На хроматограмме показаны области цис- и транс изомеров жирных кислот
Рисунок В.1 лист 3
Примечание- Получено не колонке типа CP™-Sll 66 50 м x 0,25 мм х 0.20 мкм (Chrompack) при температуре 175 °С (изотерма). Пики трансизомеров жирных кислот затенены.
Рисунок В 2 - Хроматограмма метиловых эфиров рапсового масла после физической рафинации
Таблица Г.1
| Изомеры С18 | Значения эквивалентных длин цепи при указанной неподвижной фазе и температуре | |||
| ВРХ-70 198 °С | CP™ Sil 88 175 °С | SP-2340 192 °C | ||
| С18:1 |
6цис 7цис 9цис 10цис 11цис 12цис 13цис 15цис - 6транс 7транс 9транс 10транс 11транс 12транс 13транс 15транс |
отсутствие " 18,46 отсутствие 18,53 отсутствие " " - отсутствие 18,28 отсутствие " " " " " |
18,58 18,58 18,66 отсутствие 18,74 18,80 18,87 19,00 - 18,41 18,42 18,46 18,49 18,52 18,57 18,61 18,66 |
отсутствие " 18,68 отсутствие 18,76 отсутствие " " - отсутствие " 18,49 отсутствие " " " " |
| С18:2 |
9цис 12цис 9цис 12транс 9транc 12цис 9транc 12транс 12цис 15цис |
19,14 18.94 19.02 18.69 oтсутствие |
19,63 19,40 19.49 19.20 19.92 |
19,62 19.40 19.48 19,26 oтсутствие |
| С18:3 |
6цис 9цис 12цис 9транс 12транс 5транс 9транс 12цис 15транс 9цис 12цис 15транс 9цис 12транс 15цис 9транс 12цис 15цис 9цис 12цис 15цис |
oтсутствие " 19.42 19.61 19.51 19.82 19.93 |
20,28 20,04 20,26 20,36 20,53 20.56 20.67 |
oтсутствие " 20,23 20,35 oтсутствие 20.57 20.68 |
| Примечание - Денные получены для наиболее важных изомеров жирных кислот на трех высокололярных неподвижных фазах. Для точной идентификации пиков значения ЭФЦ можно уточнить с помощью стандартных образцов метиловых эфиров жирных кислот, содержащих трансизомеры. | ||||
l
Рисунок Д.1
ИК-спектры НПВО а области 900-1050 см-1, показывающие полосу поглощения при 966 см-1 относящуюся к изолированным трансизомерам для:
А - 1%-ной градуировочной смеси. Отношение сигнал-шум в этой области равно 16:1 при 64 сканах и разрешении 4 см-1 ;
В - 10 %-ной градуировочной смеси;
С - анализируемого образца, состоящего из смеси растительных масел и частично гидрогенизированного соевого масла, в котором найдено около 14 % трансизомеров, в процентах к общему жиру.